Decision Limit & Detection Capability

CCa & CCb

Non-Compliant <----> Compliant Positive Negative

Banned substances Zero tolerance Not detectable Detection Limits ขึ้นอยู่กับวิธีทดสอบที่ใช้ ซึ่งแตกต่างกันในแต่ละห้องปฏิบัติการ จึงมีการกำหนดมาตรฐานเป็นค่า Minimum Required Performance Limit = MRPL

Banned substances วิธีทดสอบของห้องปฏิบัติการจะต้องสามารถ ทดสอบที่ระดับ MRPL ได้ ตัดสินว่าผลิตภัณฑ์ Non-compliant เมื่อความ เข้มข้นของสารในตัวอย่าง > CCa ที่ระดับความเชื่อมั่น 99 %

CCb - Detection Capability Limit of quantification New analytical limits: X Limit of detection CCa - Decision Limit X CCb - Detection Capability Limit of quantification

False positive result CC และ CC CC มาจาก critical concentration  มาจาก alpha error เป็นความผิดพลาดเนื่องจากตรวจพบ banned drug ในตัวอย่าง ทั้งที่จริงๆแล้วไม่มี banned drug ในตัวอย่าง False positive result

False negative result CC และ CC  มาจาก beta error เป็นความผิดพลาดเนื่องจากตรวจไม่พบ banned drug ในตัวอย่าง ทั้งที่จริงๆแล้วมี banned drug ในตัวอย่าง False negative result

CC และ CC นำมาใช้ในการตัดสินตัวอย่างว่าผ่านมาตรฐานหรือไม่ โดยประเมินความเข้มข้นที่ตรวจพบในตัวอย่างเทียบกับ CC และ CC

a- and ß-errors for banned compounds a-error = 1 % b-error = 5 %

CCa ความเข้มข้นที่ทำให้เกิดความผิดพลาดเท่ากับ  ในการตรวจพบสารในตัวอย่าง

ได้ค่า responses ต่างๆ ทดสอบ blank หลายๆ ซ้ำ ได้ค่า responses ต่างๆ Frequency Signal

ค่าเฉลี่ยของ response Normal distribution XB Frequency Signal

XB ค่าเฉลี่ย + 2.33 SD Frequency a = 1 % CCa Signal

1% ที่ให้ผลทดสอบมีค่า > CCa blank samples จำนวน 1% ที่ให้ผลทดสอบมีค่า > CCa XB Frequency CCa Signal

ซึ่งเป็น false positive results (> Zero) = a-Error = 1% XB Frequency CCa Signal

CC มีค่ามากกว่า 0 และน้อยกว่า MRPL Decision Limit - banned substances CC มีค่ามากกว่า 0 และน้อยกว่า MRPL

XB Frequency CCa Signal

ตัวอย่างที่มีความเข้มข้นเฉลี่ย = CCa Frequency CCa Signal

50 % ตรวจไม่พบสาร Frequency CCa Signal

50 % ตรวจพบสาร Frequency CCa Signal

Banned substances ที่ความเข้มข้น CC False negative rate = 50%

ถาม: ตอบ: ที่ความเข้มข้น Detection Capability (CCb) ที่ความเข้มข้นของ banned drug เท่าไรที่มั่นใจได้ 95% ว่าผลทดสอบตัวอย่างไม่ผ่านมาตรฐาน ตอบ: ที่ความเข้มข้น Detection Capability (CCb)

CCb-banned substance ความเข้มข้นที่วิธีทดสอบสามารถตรวจพบ banned drug ได้อย่างแท้จริง โดยมีความมั่นใจ 95%

Frequency CCa Signal

< 50 % ตรวจไม่พบสาร Frequency CCa Signal

<< 50 % ตรวจไม่พบสาร Frequency CCa Signal

= false negative results 5 % ตรวจไม่พบสาร = false negative results Frequency CCa CCb Signal

(และ CCb จะต้อง < MRPL) Banned substances ที่ความเข้มข้น CCb False positive rate = น้อยมากๆ False negative rate = 5% (และ CCb จะต้อง < MRPL)

การหาค่า CCa และ CC-banned drug สามารถทำได้ 2 วิธี 1. ทดสอบ fortified sample blank 3 ความเข้มข้น หรือ 2. ทดสอบ sample blank

การหาค่า CCa - วิธีที่ 1 Fortify negative matrix ที่ความเข้มข้น 1.0, 1.5 และ 2 เท่าของ MRPL ทดสอบแต่ละความเข้มข้น 7 ซ้ำ ทดสอบเช่นนี้อีก 2 ครั้ง ในวันที่แตกต่างกัน เขียนกราฟระหว่าง signal (แกน Y) กับความ เข้มข้นที่ fortify (แกน X)

within-laboratory reproducibility S.D. of the within-laboratory reproducibility  Calibration line Signal 1.0 x MRPL 2.0 x MRPL 1.5 x MRPL

คำนวณ SE ของ intercept Calibration line Signal  1.0 x MRPL 1.5 x MRPL

คูณ SE ด้วย 2.33 (1%, one sided)  Calibration line  Signal  1.0 x MRPL 1.5 x MRPL 2.0 x MRPL

CCa คือความเข้มข้นที่ได้จาก signal ที่มีค่าเท่ากับ (Intercept) + (2.33 x SE of the within laboratory reproducibility of the intercept) CCa = ( 2.33SEintercept ) / slope  Calibration line  Signal Intercept + (2.33 x SEInt) CCa  1.0 x MRPL 1.5 x MRPL 2.0 x MRPL

การหาค่า CCb – วิธีที่ 1 Fortify negative matrix ที่ความเข้มข้นน้อยกว่าและเท่ากับ MRPL โดยแบ่งช่วงห่างเท่าๆ กัน เขียนกราฟระหว่าง signal (แกน Y) กับความเข้มข้นที่ fortify (แกน X) CC = ( 2.33SEintercept + 1.64SECC ) / slope

CCb คือความเข้มข้นที่ได้จาก Signal ที่มีค่าเท่ากับ (signalของ CCa) + (1.64 x SE ของ W/L reproducibility at CCa)  Signal at CCa + 1.64 x SE ของ W/L reproducibility at CCa CCb Calibration line  Signal  CCa 0.33 x MRPL 0.66 x MRPL 1.00 x MRPL

การหาค่า CCa - วิธีที่ 2 ทดสอบ sample blank  20 ซ้ำ คำนวณ S : N ratio CCa เท่ากับ 3 เท่าของ S : N ratio

การหาค่า CCb – วิธีที่ 2 ทดสอบ fortified sample blank ที่ความ เข้มข้นเท่ากับ CCa  20 ซ้ำ CCb = CCa + 1.64 S.D.

การหาค่า CC และ CCb – วิธีที่ 3 ทดสอบ sample blank 20 ซ้ำ คำนวณค่าเฉลี่ยของ response ( n) และ SDของ response (SDn) ทดสอบ fortified sample blank 21 ซ้ำ คำนวณ RSD ของ response (RSDs) slope จาก calibration curve = a

การหาค่า CC และ CCb – วิธีที่ 3 CC = 2.33 (SDn) / a CC = 2.33 (SDn) + 1.64 (n) (RSDs) a [ 1 – 1.64 (RSDs) ]

} } ตรวจสอบวิธีทดสอบที่ใช้ว่าสามารถทดสอบ ที่ระดับ MRPL (หรือต่ำกว่า) ได้หรือไม่ Chloramphenicol (MRPL = 0.3 µg/kg) ทดสอบ sample blank และ fortified sample blank ที่ความเข้มข้นต่างๆ ดังนี้ 0.10, 0.20, 0.30, 0.45, 0.60 µg/kg } < MRPL } > MRPL

ตรวจสอบวิธีทดสอบที่ใช้ว่าสามารถทดสอบ ที่ระดับ MRPL (หรือต่ำกว่า) ได้หรือไม่ ทดสอบแต่ละความเข้มข้น 7 ซ้ำ ทดสอบเช่นนี้อีก 2 ครั้ง ในวันที่แตกต่างกัน ตรวจสอบ accuracy และ precision

ผลกรณีที่ 1 Q. What is CCß? A. < 0.1 µg/kg

ผลกรณีที่ 1 Q. Is method fit-for-purpose? A. Yes. CCb is less than MRPL.

ผลกรณีที่ 2 Q. What is CCß? A. ~0.20 µg/kg

ผลกรณีที่ 2 Q. Is method fit-for-purpose? A. Yes. CCb is less than MRPL.

ผลกรณีที่ 3 Q. What is CCß? A. 0.30 - 0.45 µg/kg

ผลกรณีที่ 3 Q. Is method fit-for-purpose? A. No. CCb is greater than MRPL.

Licensed substances กำหนดมาตรฐานเป็นปริมาณตกค้างสูงสุดใน ผลิตภัณฑ์ ( Maximum Residue Limit = MRL ) วิธีทดสอบของห้องปฏิบัติการจะต้องสามารถทดสอบ ที่ปริมาณ MRL ได้ ตัดสินว่าผลิตภัณฑ์ Non-compliant เมื่อความ เข้มข้นของสารในตัวอย่าง > CCa ที่ระดับความเชื่อมั่น 95 %

a- and ß-errors for licensed compounds a-error = 5 % b-error = 5 %

1.64SPL 1.64SS XB PL CCa CC Frequency a  XPL XS Signal

การหาค่า CCa และ CC-licensed drug สามารถทำได้ 2 วิธี 1. ทดสอบ fortified sample blank 3 ความเข้มข้น หรือ 2. ทดสอบ fortified sample blank เพียงความเข้มข้นเดียว

การหาค่า CCa - วิธีที่ 1 Fortify negative matrix ที่ความเข้มข้น ใกล้เคียงกับ PL โดยแบ่งช่วงห่างเท่าๆ กัน ทดสอบแต่ละความเข้มข้น 7 ซ้ำ ทดสอบเช่นนี้อีก 2 ครั้ง ในวันที่แตกต่างกัน เขียนกราฟระหว่าง signal (แกน Y) กับความ เข้มข้นที่ fortify (แกน X)

การหาค่า CCa - วิธีที่ 1 CC คือความเข้มข้นที่ได้จาก Signal ที่มีค่าเท่ากับ (signal ของ PL) + (1.64 x SE ของ W/L reproducibility)

การหาค่า CCb – วิธีที่ 1 Fortify negative matrix ที่ความเข้มข้น ใกล้เคียงกับ PL โดยแบ่งช่วงห่างเท่าๆ กัน ทดสอบแต่ละความเข้มข้น 7 ซ้ำ ทดสอบเช่นนี้อีก 2 ครั้ง ในวันที่แตกต่างกัน เขียนกราฟระหว่าง signal (แกน Y) กับความ เข้มข้นที่ fortify (แกน X)

การหาค่า CCb – วิธีที่ 1 CCb คือความเข้มข้นที่ได้จาก Signal ที่มีค่าเท่ากับ (signalของ CCa) + (1.64 x SE ของ W/L reproducibility at CCa)

การหาค่า CCa - วิธีที่ 2 ทดสอบ fortified sample blank  20 ซ้ำ CCa = MRL + 1.64SD

การหาค่า CCb – วิธีที่ 2 ทดสอบ fortified sample blank ที่ความ เข้มข้นเท่ากับ CCa  20 ซ้ำ CCb = CCa + 1.64 S.D.