สไลด์การสาธิตการทำ Cellulose Acetate Electrophoresis คณะผู้จัดทำ : 1. รศ. ดร. อาภัสสรา ชูเทศะ 2. นายสมหมาย หอมสวาท 3. น.ส. อรพรรณ สังข์สัมฤทธิ์ ภาควิชาสรีรวิทยา คณะสัตวแพทยศาสตร์ มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์

อ่างแช่แผ่น cellulose acetate rack วางแผ่น cellulose acetate

applicator ช่องบรรจุสารตัวอย่าง ฐานวางแผ่น cellulose acetate

อ่าง electrophoresis power supply

กระดาษกรองหรือ wick แผ่น cellulose acetate และบัฟเฟอร์

ใส่สารละลายบัฟเฟอร์ประมาณ 100 ml ในอ่างขั้วลบ

ใส่สารละลายบัฟเฟอร์ประมาณ 100 ml ในอ่างขั้วบวก

ใช้กระดาษกรอง (wick) 2 แผ่นที่ชุ่มด้วยบัฟเฟอร์มาวางพาดตรงที่กั้นอ่างทั้ง 2 โดยปลายด้านหนึ่งของกระดาษกรองจุ่มอยู่ในบัฟเฟอร์ในอ่าง เพื่อเชื่อม ระหว่างแผ่น cellulose acetate กับบัฟเฟอร์ในอ่าง

การวางแผ่น wick ในอ่างขั้วบวก

micropipette และสารตัวอย่าง ดูดสารตัวอย่างใส่ลงในช่องบรรจุ

ช่องบรรจุมีสารตัวอย่างและสารมาตรฐาน ครบทั้ง 8 ช่อง ปิดช่องสารด้วยแผ่นสไลด์เพื่อป้อง กันการระเหย

ตัดมุมหนึ่งของแผ่น cellulose acetate เพื่อให้ทราบตำแหน่งของสารตัวอย่าง และด้านขั้วบวก/ขั้วลบ นำแผ่น cellulose acetate มาวางใน rack

นำแผ่น cellulose acetate มาแช่ในสารละลายบัฟเฟอร์ ตามเวลาที่กำหนด

เมื่อครบกำหนดเวลา นำแผ่น cellulose acetate มาซับให้แห้งโดยใช้กระดาษกรอง มุมอยู่ตรงเส้น center application หรือ cathode application (แล้วแต่กรณีการแยก สาร)

กด applicator ลงในช่องบรรจุสารตัวอย่าง 3-4 ครั้ง นำ applicator มากดลงบน แผ่น cellulose acetate นาน 5 วินาที

นำแผ่น cellulose acetate มาวางพาดระหว่างอ่างทั้ง 2 โดยวางคว่ำหน้า

ปิดฝาอ่าง เปิดเครื่อง power supply ตั้งศักย์ไฟฟ้าและเวลาตามที่กำหนด

สีย้อม Ponceau S สารละลายล้างสีย้อม methanol และสารละลาย clearing

ย้อมแผ่น cellulose acetate ด้วย Ponceau S ล้างสีย้อมด้วย acetic acid

ล้างสีย้อมจน background ไม่ติดสี แช่แผ่น cellulose acetate ใน methanol

แช่แผ่น cellulose acetate ในสารละลาย clearing หลังอบที่ 600C จะได้แผ่นใส นำไปวิเคราะห์ผลต่อได้

- Hemoglobin Phenotype by Cellulose Acetate Electrophoresis + Hb A Carbonic anhydrase A2 S F - + 1 2 This result was run on pH 8.2-8.6 at 350 volts for 25 mins. Lane assingments: lane 1 = AFSA2 Hemo Control of Helena Laboratory, U.S.A. and lane 2 = Hbs of the Thai ridgeback dog from hemolysates ที่มา : Hemoglobins in Thai Ridgeback Dogs: Chromatographic, Electrophoretic and Mass Spectrometric Studies Jatuporn Noosud, Sittiruk Roytrakul, Chaiwat Boonkaewwan, Apassara Choothesa, KKU Vet J. 20(2) : 133-142, 2010