งานนำเสนอกำลังจะดาวน์โหลด โปรดรอ

งานนำเสนอกำลังจะดาวน์โหลด โปรดรอ

การเตรียมความพร้อมสำหรับ งานวิจัยที่ใช้เทคนิค recombinant DNA การประชุมคณะกรรมการความปลอดภัยทางชีวภาพระดับสถาบันภูมิภาค ประจำปี 2551: ครั้งที่ 1 ภูมิภาคตะวันออกเฉียงเหนือ.

งานนำเสนอที่คล้ายกัน


งานนำเสนอเรื่อง: "การเตรียมความพร้อมสำหรับ งานวิจัยที่ใช้เทคนิค recombinant DNA การประชุมคณะกรรมการความปลอดภัยทางชีวภาพระดับสถาบันภูมิภาค ประจำปี 2551: ครั้งที่ 1 ภูมิภาคตะวันออกเฉียงเหนือ."— ใบสำเนางานนำเสนอ:

1 การเตรียมความพร้อมสำหรับ งานวิจัยที่ใช้เทคนิค recombinant DNA การประชุมคณะกรรมการความปลอดภัยทางชีวภาพระดับสถาบันภูมิภาค ประจำปี 2551: ครั้งที่ 1 ภูมิภาคตะวันออกเฉียงเหนือ วันที่ 8 สิงหาคม 2551 ณ ห้องรับขวัญ ชั้น 3 อาคารขวัญมอ มหาวิทยาลัยขอนแก่น รศ.ดร.เพชรรัตน์ ธรรมเบญจพล

2 Basic steps in gene cloning 1. นำชิ้นส่วนดีเอ็นเอที่มียีนหรือส่วนที่ต้องการ เข้าไปเชื่อมต่อกับโมเลกุลของดีเอ็นเอ พาหะ (vector) ได้เป็นโมเลกุลดีเอ็นเอ สายผสม (recombinant DNA molecule) 2. ส่ง recombinant DNA molecule เข้าไป ในเซลล์อาศัย (host cell) 3. ส่วนของ recombinant DNA molecules เพิ่มปริมาณใน host cell เป็นจำนวนมาก (มีหลาย copy) 4. เมื่อ host cell แบ่งตัวเองเพิ่มปริมาณ ส่วน ของ recombinant DNA molecule จะถูก ส่งถ่ายออกไปในเซลล์ใหม่และเพิ่ม ปริมาณในเซลล์ใหม่ได้เหมือนเดิม 5. สุดท้ายจะได้กลุ่มเซลล์ที่เหมือนๆ กัน (โคโลนี) เรียกว่า โคลน แต่ละเซลล์ของโคลนใดโคลนหนึ่งจะมีส่วน ของ recombinant DNA moleculesที่ เหมือนกัน

3

4 ขั้นตอนของการปรับปรุงพันธุ์พืชโดยพันธุวิศวกรรม 1. เลือกชนิดพืชที่ต้องการปรับปรุง / ระบบเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อพืช 2. เลือกยีนที่เกี่ยวข้องกับลักษณะที่ต้องการปรับปรุง - gene cloning, - nucleotide sequencing, - manipulating of gene into plant expression vector 3. เลือกวิธีการส่งถ่ายยีน(gene gun, Agrobacterium-mediated) 4. การคัดเลือกและตรวจสอบ transgenic plant (lab., greenhouse) 5. การทดสอบ performance ของ transgenic plant in field condition, property of target character (field trial, bioassay) 6. ทดสอบ biosafety for environment, human health, ecology, etc. 7. Releasing for growing in open field, commercial scale.

5 การเตรียมความพร้อมสำหรับงานวิจัยที่ ใช้เทคนิค recombinant DNA สถาบันการศึกษา วิจัยสร้างผลงาน - องค์ความรู้ - ผลิตภัณฑ์ นวัตกรรม ผลิตบุคลากรด้าน เทคโนโลยีชีวภาพ ให้กับประเทศชาติ

6 ขอบเขตของงานวิจัยด้าน Recombinant DNA 1. การเตรียมตัวอย่างดีเอ็นเอ 2. การจัดการตัดต่อดีเอ็นเอ 3. การส่งถ่ายดีเอ็นเอสายผสมเข้าสู่ เซลล์อาศัย (host cell) 4. การตรวจสอบว่ามีดีเอ็นเอสายผสมเกิดขึ้น 5. การเก็บรักษาโคลน( recombinant clone)

7 สิ่งเกี่ยวข้องที่สำคัญ วิธีการปฏิบัติงาน (คู่มือการปฏิบัติงาน สมุดบันทึก การทำงาน) วัสดุ สารเคมี เครื่องมือขนาดเล็ก เครื่องมือขนาด ใหญ่ สถานที่ (ห้องปฏิบัติการ, โรงเรือนปลูกพืช ทดลอง) เจ้าหน้าที่ -หัวหน้าห้องปฏิบัติการ -ผู้ปฏิบัติการวิจัย -ผู้ช่วยอื่นๆ (ฝ่ายสนับสนุน) -ผู้เข้ามารับบริการในรูปแบบต่างๆ (นักศึกษาฝึกงาน ดูงาน ฯลฯ) ฝ่ายตรวจสอบมาตรฐานต่างๆ(ภายใน,ภายนอก)

8 วิธีการปฏิบัติงาน (คู่มือปฏิบัติการ, สมุดบันทึกการทำงาน) -Buffer /Reagent Preparations -DNA extraction -Agarose gel electrophoresis - DNA ligation -Screening for recombinant DNA -Etc. ควรมีรูปแบบมาตรฐานในการจดบันทึกงาน แผนที่นำทางสู่ ความสำเร็จ เอกสารอ้างอิง

9 วัสดุอุปกรณ์ในงานวิจัย วัสดุวิทยาศาสตร์ วัสดุเกษตร วัสดุสำนักงาน เครื่องมือต่างๆ -Glass ware -Plastic ware -Metalic ware -ต้องรู้จักคุณสมบัติพื้นฐาน -ทราบวิธีการใช้งานที่ถูกต้อง -ทราบวิธีการเก็บรักษา การดูแลก่อนและหลัง การใช้งานให้เหมาะสม

10 เครื่องมือพื้นฐาน : อุปกรณ์ฆ่าเชื้อจุลินทรีย์ - ระบบความร้อนชื้น (Autoclave) - ระบบความร้อนแห้ง (Hot air oven) -ตะเกียงแอลกอฮอล์ -ตู้ที่มีหลอด ultraviolet ชุดกรองเชื้อจุลินทรีย์ ( filter membrane)

11 เครื่องมือพื้นฐาน : เครื่องชั่งสาร (balance) -เครื่องชั่งหยาบ -เครื่องชั่งละเอียด (2, 3, 4 ตำแหน่ง) วัสดุอุปกรณ์สำหรับชั่งสาร - spatula - ถาดรองสารเคมี - กระดาษรองชั่งสารเคมี -งานทั่วไป -งานด้านชีวโมเลกุล

12 เครื่องมือพื้นฐาน : การเตรียมบัพเฟอร์ เตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อจุลินทรีย์ -pH meter -Mixer -Hot plate -เตาแก๊สหุงต้ม -Fume hood

13 เครื่องมือพื้นฐาน : การสกัดดีเอ็นเอ ultracentrifuge microcentrifuge High speed centrifuge Benchtop refrigerate microcentrifuge ใช้แยกสารชีวโมเลกุล โดยแรงปั่นเหวี่ยง

14 เครื่องมือพื้นฐาน : ตรวจสอบคุณภาพ DNA/RNA/Protein -Gel electrophoresis apparatus (Horizontal, Vertical) -Spectrophotometer (UV/visible) -Gel documentation

15 เครื่องมือพื้นฐาน : เก็บรักษาสภาพ Sample, DNA,RNA, protein, recombinant clones, buffers, reagents 4 o C, -20 o C, (-70 o C)

16 เครื่องมือพื้นฐาน: เครื่องมือดูดสารละลาย -เครื่องมือดูด สารละลายปริมาตรต่ำ (Micropipettes) -Multi-channel Micropipette -Pasture pipette, -Pipette

17 ลมเป่าจาก บนลงล่าง ลมเป่าออกด้านหน้า Larminar Flow Clean Bench เครื่องมือพื้นฐาน : ตู้ย้ายเชื้อจุลินทรีย์ ระดับความปลอดภัยทางชีวภาพ ของงานวิจัยด้านจุลินทรีย์กำหนด รูปแบบของตู้ย้ายเชื้อจุลินทรีย์ที่ บังคับใช้

18 เครื่องมือพื้นฐาน: การเพาะเลี้ยงเชื้อจุลินทรีย์ -ตู้บ่มเชื้อ (incubator) -เครื่องเขย่าเพาะเลี้ยงเชื้อ (shaker incubator) -Rotary shaker -Waterbath shaker

19 เครื่องมือเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอในหลอด ทดลอง (PCR) -Thermal cycler ( พื้นฐาน ) -Realtime-PCR

20 เครื่องมือพื้นฐาน: งาน Nucleic acid hybridization -Synthesis DNA probe -Hybridization -Detection Hybridization oven

21 DNA พืช /Hind III cut ก่อนย้ายลงเมมเบรนหลังย้ายลงเมมเบรน สัญญาณไฮบริไดซ์ กับ DNA probe ผลการตรวจ Southern blot hybridization งานด้าน Nucleic acid hybridization

22 ประเภทสารเคมี 1. สารเคมีปรกติ ไม่อันตราย 2. สารไวไฟ/ จุดระเบิดได้ 3. สารมีฤทธิ์กัด กร่อน : กรด ด่าง phenol 4. สารที่ก่อให้เกิดการเปลี่ยนแปลง ทางพันธุกรรม (mutagen, carcinogen) เช่น ethidium bromide 5. เอนไซม์

23 Agarose gel electrophoresis Agarose gel = matrix for separation DNA molecules

24 - ระบบการจัดเก็บสารเคมีที่ถูกต้อง สะดวก - ระบบการบันทึกการใช้สารเคมี - ระบบการตรวจสอบคุณภาพ/ อายุการ ใช้งานของสารเคมี - การเลือกใช้สารเคมีให้เหมาะสม - ความเข้าใจในสลากกำกับข้างขวด สิ่งควรทำ

25 น้ำ : คุณภาพน้ำ น้ำก๊อก น้ำกรอง น้ำกลั่น น้ำปลอดอิออน น้ำ RO เลือกให้เหมาะสมกับงาน

26 ระบบไฟฟ้า 1.เพียงพอสำหรับเครื่องมือต่างๆ ไฟแสงสว่าง 2.ควรมีระบบไฟฉุกเฉิน ไฟสำรอง 3.เหมาะสมกับกำลังการใช้ไฟฟ้าของเครื่องมือ - ไฟ 2 phase, 3 phase volts, 220 volts 4. ระบบป้องกันภัยจากไฟฟ้าลัดวงจร มาตรการประหยัดพลังงาน

27 ระบบการจัดการของเสีย 1.วัสดุสิ่งของที่ใช้แล้ว (ขยะปรกติ ขยะอันตราย ที่มีการปนเปื้อนสารเคมีอันตราย เชื้อจุลินทรีย์ อันตราย ขยะที่ระเบิดได้ ฯลฯ) 2.สารเคมีที่ใช้แล้ว (สารเคมีปรกติ สารเคมีเป็น อันตรายต่อสุขภาพ สารเคมีอันตรายต่อ สภาพแวดล้อม) - ระบบควบคุมภายในห้องปฏิบัติการ - ระบบควบคุมจากหน่วยงานสังกัด - ระบบควบคุมจากหน่วยงานภายนอก

28 สถานที่ (ห้องปฏิบัติการ) -เหมาะสมกับลักษณะของงาน -ปลอดภัยสำหรับผู้ปฏิบัติการ/ ผู้ที่เกี่ยวข้อง ปรึกษาผู้เชี่ยวชาญด้านการออกแบบห้องปฏิบัติการ สิ่งสำคัญ -การจัดระบบปฏิบัติงานต่างๆ -การบริหารจัดการห้อง lab

29 นักวิจัย/เจ้าหน้าที่/ ผู้ใช้ห้องปฏิบัติการ -ความชำนาญ เชี่ยวชาญ -จิตสำนึกด้านความปลอดภัยใน การปฏิบัติงาน ประหยัดทรัพยากร รักษาสภาพแวดล้อม

30 ฝ่ายตรวจสอบมาตรฐานต่างๆ (ภายใน,ภายนอก) - การจัดระดับห้องปฏิบัติการ - มาตรการด้านความปลอดภัยทั่วไป - มาตรฐานในการดำเนินงานตามกิจกรรมหลัก ของห้องปฏิบัติการ/หน่วยงาน (ความน่าเชื่อถือ การยอมรับในระดับสากล) = ระบบ ISO -มาตรการด้านความปลอดภัยทางชีวภาพ

31 การเตรียมความพร้อมสำหรับงานวิจัย ที่ใช้เทคนิค recombinant DNA -Infrastructure -Researcher /Technical staffs -Research budget -Maintenance cost

32 บทบาทของ IBC ? 1. ดูแลเฉพาะเรื่องความปลอดภัยทาง ชีวภาพ (สิ่งมีชีวิตดัดแปลงพันธุกรรม) ตาม ภาระหน้าที่ที่ได้รับมอบหมายจาก NBC 2. รับผิดชอบในข้อ 1 + ตรวจสอบระบบ มาตรฐานความปลอดภัยของ ห้องปฏิบัติการเทคโนโลยีชีวภาพ

33 ขอบคุณ

34 สิ่งที่ควรผลักดันเพื่อให้งานวิจัย ดำเนินไปได้อย่างมีมาตรฐานสากล 1. วิสัยทัศน์ของผู้บริหารองค์กร 2. งบประมาณสนับสนุนการดำเนินงานด้านการ ควบคุมมาตรฐานต่างๆ ที่เกี่ยวข้องกับงานวิจัย การเรียนการสอนที่เกี่ยวข้อง -โครงสร้างพื้นฐาน สถานที่ วัสดุอุปกรณ์ ฯลฯ -บุคลากร -เครือข่าย/ ระบบงานต่าง ๆที่สัมพันธ์กัน

35 กฏเกณฑ์กติกาที่เกี่ยวข้อง มาตรฐานความปลอดภัยในห้องปฏิบัติการ มาตรฐานความปลอดภัยต่อสังคม สิ่งแวดล้อม ฯลฯ ISO มาตรการสุขอนามัยพืช มาตรฐานสินค้าเกษตรและอาหารแห่งชาติ พรบ.กักพืช (กรมวิชาการเกษตร) (ร่าง) พรบ.ความปลอดภัยทางชีวภาพของเทคโนโลยีชีวภาพ สมัยใหม่ การค้าระหว่างประเทศ (FTA) WTO HACCP มาตรฐานสากล มาตรฐานระดับประเทศ ภาคีสัญญาระหว่างประเทศ : พิธีสารคาตาเฮน่า

36 สะสาง (Seiri 整理 ) จัดแยกสิ่งของที่ จำเป็นต้องใช้ และกำจัด สิ่งของที่ไม่จำเป็นต้องใช้ ออกไป สะดวก (Seiton 整頓 ) จัดวางสิ่งของที่จำเป็นต้องใช้ ไห้เป็นระเบียบ สะดวกต่อการ นำมาใช้ และเก็บเข้าที่ สะอาด (Seiso 清楚 ) จัดระเบียบการดูแลความสะอาดของ สถานที่ทำงาน พื้นที่ทางเดินให้ ปราศจากขยะ ฝุ่นผง และเศษวัสดุอยู่ เสมอ สุขลักษณะ (Seiketsu 清潔 ) จัดของให้เป็นระเบียบเรียบร้อยวางใน ตำแหน่งที่ควรอยู่ และรักษา สภาพแวดล้อม สถานที่ทำงานให้สะอาด เรียบร้อย สร้างนิสัย (Shitsuke 躾 ) ดำเนินงานในเรื่องสะสาง สะดวก สะอาด สุขลักษณะ อย่างต่อเนื่องจนเป็นนิสัย 5 ส เพื่อความปลอดภัย

37 การดูแลความปลอดภัย ในห้องปฏิบัติการ โครงการอบรม เรื่อง ความรู้เกี่ยวกับสารเคมีเบื้องต้นและการดูแลความปลอดภัยในห้องปฏิบัติการ ภาควิชาเคมีเทคนิค คณะวิทยาศาสตร์ วันพฤหัสบดีที่ 3 เมษายน 2551 ณ ห้อง 308 ชั้น 3 อาคารมหามกุฏ ประเสริฐ เรียบร้อยเจริญ

38 การจัดการห้องปฏิบัติการ : จะเริ่ม อย่างไร ??? 1. จัดทำคู่มือความปลอดภัย 2. ประเมินเบื้องต้น - รายการเครื่องมือและอุปกรณ์ต่างๆ - รายการสารเคมีและปริมาณ - รายการอุปกรณ์เพื่อความปลอดภัย ( ตู้ยา เครื่องดับเพลิง อ่าง ล้างตา และที่ล้างตัวฉุกเฉิน ) 2. จัดทำแผนผังห้องปฏิบัติการ พร้อมทั้งการประเมินความ เหมาะสม และแก้ไข 3. ประเมินละเอียด โดยการตรวจสอบความปลอดภัยต่างๆ ตาม Check list ที่เหมาะสม - ความสะอาด กลิ่น - การจัดวางเครื่องมือ - ทางออก ทางเดิน - อื่นๆ 4. จัดทำแผนฉุกเฉิน ในการระงับเหตุ

39 การจัดทำคู่มือความปลอดภัย กำหนดทีมงาน กำหนดข้อปฏิบัติต่างๆ – ข้อปฏิบัติของนิสิต – ระเบียบเพื่อความ ปลอดภัย –.... ความรู้เบื้องต้นต่างๆ – สารเคมี – การระงับเหตุ – อัคคีภัย อื่นๆ ตามความเหมาะสม

40 ( ร่าง ) พระราชบัญญัติว่าด้วยความ ปลอดภัยทางชีวภาพของ เทคโนโลยีชีวภาพสมัยใหม่ พ. ศ.... ( ฉบับแก้ไขเดือนเมษายน ๒๕๕๐ ) บรรยายโดย อาจารย์ เศรษฐบุตร อิทธิธรรมวินิจ คณะเศรษฐศาสตร์ มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ และ ดร. วิเทศ ศรีเนตร สำนักงานนโยบายและแผน ทรัพยากรธรรมชาติและสิ่งแวดล้อม

41 ข้อกำหนดทั่วไป (General Provisions) ๑.หลักการและเหตุผล ๒. ขอบเขต ม. ๔, ม. ๕ ๓. นิยาม ม. ๓ ๔. คณะกรรมการ และหน่วยงาน ผู้รับผิดชอบ ม. ๗ - ๑๘ 4. การปลดปล่อยสู่สิ่งแวดล้อมโดย จงใจ ม. ๓๗ - ๔๖ 8. เหตุฉุกเฉินและการปลดปล่อยโดย ไม่จงใจ ม. ๖๓ - ๖๕ 9. การรับฟังความคิดเห็นของประชาชน การเปิดเผย และการปกปิดข้อมูล ม. ๖๖ - ๗๐ (Unintentional Release and Emergency) 3. การใช้ในการทดลองภาคสนาม สภาพจำกัด ม. ๓๒ - ๓๖ 2. การใช้ในสภาพควบคุม ม. ๒๕ - ๓๑ 5. การจำหน่ายเพื่อเป็นอาหาร หรืออาหารสัตว์ และการใช้เพื่อการผลิต ม. ๔๗ - ๕๓ 6. การพักใช้ การเพิกถอน ใบอนุญาต และการเลิกประกอบ กิจการตามใบอนุญาต ม. ๕๔ - ๖๐ 7. การดูแล ขนส่ง เคลื่อนย้าย เก็บ รักษา บรรจุหีบห่อและชี้จำแนก ม. ๖๑ - ๖๒ ข้อกำหนดเสริมและสนับสนุน (Supportive Provisions) 4. ความรับผิดและ การชดใช้ความ เสียหาย ม. ๘๓ - ๙๐ 5. บทกำหนดโทษ ม. ๙๑ - ๑๐๘ 2. พนักงาน เจ้าหน้าที่ ม. ๗๖ - ๘๐ 1. กองทุนความ ปลอดภัยทาง ชีวภาพ ม. ๗๑ - ๗๕ 3. การอุทธรณ์ ม. ๘๑ - ๘๒ 6. บทเฉพาะกาล ม. ๑๐๙ - ๑๑๐ โครงสร้าง (ร่าง) พระราชบัญญัติว่าด้วยความปลอดภัยทางชีวภาพ ของเทคโนโลยีชีวภาพสมัยใหม่ พ.ศ.... (Structure of draft Biosafety Act) ข้อกำหนดที่ใช้ในการดำเนินการ (Operational Provisions) 1. การนำเข้าและส่งออก ม. ๑๙ - ๒๔

42 การวิเคราะห์ขนาด plasmid DNA Recombinant E. coli แยกสกัด recombinant ด้วยวิธี alkaline lysis Recombinant E. coli ตรวจสอบบน 1% agarose gel CGMMV-me25 TMV Insert cDNA


ดาวน์โหลด ppt การเตรียมความพร้อมสำหรับ งานวิจัยที่ใช้เทคนิค recombinant DNA การประชุมคณะกรรมการความปลอดภัยทางชีวภาพระดับสถาบันภูมิภาค ประจำปี 2551: ครั้งที่ 1 ภูมิภาคตะวันออกเฉียงเหนือ.

งานนำเสนอที่คล้ายกัน


Ads by Google